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本试剂盒使用离心吸附柱硅基质膜全部采用进口特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。在高盐条件下RNA与硅胶吸附膜高效、专一地结合，同时最大限度除去蛋白质、无机盐离子和许多有机杂质等，在低盐条件下，RNA被洗脱。可处理的RNA样品量可高达50μg。本试剂盒用于从酶反应液（如DNase处理、蛋白酶处理、RNA标记等）中纯化回收RNA，也可用于从其它方式提取获得的RNA的纯化。纯化的总RNA没有蛋白的污染，所得的RNA可用于Northern blot、Dot blot、mRNA提取、cDNA合成、引物延伸、差异显示等。

组分	规格
结合液RC	20mL
漂洗液RW	10mL
RNase-free H2O	10mL
RNase-free吸附柱RA	50个
收集管（2mL）	50个

保存：室温，有效期一年。

• 所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。
  
• 避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、PH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

第一次使用前请先在漂洗液RW瓶中加入指定量乙醇，加入后请及时打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!


以下所有步骤均可以在室温进行，但是应该迅速操作，减少RNA降解机会。

• 冰上RNA样品加入RNase-free water补足至100μL，加入350μL溶液RC，混匀。
  
• 加入250μL无水乙醇，混匀，无需离心。
  
• 上一步所得溶液和可能有的沉淀一起转入吸附柱RA中（吸附柱套在收集管内），4℃ 12000rpm离心45秒，弃掉收集管中的废液，将吸附柱重新套回收集管。
  注：如需去除DNA微量残留，可在本步骤后进行DNA酶柱子上直接消化，详见附录。
  
• 加0.5mL漂洗液RW（请先检查是否已加入乙醇），4℃ 12000rpm离心45秒，弃废液。
  
• 加0.5mL漂洗液RW，4℃ 12000rpm离心45秒，弃废液。
  
• 4℃ 13000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液，以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
  
• 取出吸附柱RA，放入一个RNase-free离心管中，根据预期RNA产量在吸附膜的中间部位加50～80μL RNase-free water（事先在65～70℃水浴中加热效果更好），室温放置2分钟，12000rpm离心1分钟。如果需要较多RNA，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，离心1分钟，或者另外再加30μL RNase-free water，离心一分钟，合并两次洗脱液。
  注：洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要RNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积，但是最小体积最好不少于30μL，体积过小降低RNA洗脱效率，减少RNA产量。

附录：DNase I柱上消化
本试剂盒还可以进行离心柱上DNA酶消化以去除RNA样品中微量DNA污染，如果要进行严格的mRNA表达量分析如荧光定量PCR，可以购买各种商品化的RNase-free DNase直接在离心吸附柱子RA上面消化DNA，然后纯净RNA可以洗脱下来直接使用。客户可根据需要向本公司购买去蛋白液RW1。

以DNase I柱上消化试剂盒(货号：ALH432)举例

• DNase I工作液的配制：
  取45μL DNase I buffer和5μL RNase-free DNase I离心管轻轻吹打混匀成工作液（处理多个离心柱子要按照比例放大制备工作液）。
  注：如果残留DNA过多导致消化不完全，可按比例加大使用酶量来提高消化效果（如90μL DNase I buffer和10μL RNase-free DNase I）。
  
• 操作步骤：
  
  • 前面按照正常步骤操作，在步骤3完成后按照以下步骤操作。
    
  • 向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
    
  • 向吸附柱RA中央加入50μL的DNase I工作液，室温（20～30℃）放置15分钟。
    注意：直接将工作液滴在膜中央上，不要让工作液滴在O型圈或是离心柱管壁上。
    
  • 向吸附柱RA中加入350μL去蛋白液RW1，12000rpm离心30～60秒，弃废液，将吸附柱放回收集管中。
    
  • 接漂洗液RW步骤等后续步骤。如果是其它公司试剂盒，则接最后的一个漂洗液漂洗等后续步骤。

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